Anti-His免疫磁珠-免疫磁珠-和元李记

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Anti-His免疫磁珠

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产品货号

产品规格

原价

AP62L202

1mL

1600

下载说明书李记-葛(18616108315)

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产品描述

Anti-His磁珠是粒径为200nm的纳米磁珠表面上共价结合了大量的高质量的鼠源抗His单克隆抗体纳米级磁珠提供的超大比表面积，具有更多的结合位点，磁珠使用量更少，非特异性吸附率低。本产品广泛应用于细胞裂解物、细胞分泌上清、血清、腹水等样品中带有His标签融合蛋白的免疫沉淀（IP）或免疫共沉淀（Co IP）。由于采用磁性分离，使得每次IP和Co IP可以节省40%的时间。

订购信息

产品名称	货号	规格
Anti-His免疫磁珠	AP62L202	1 mL

运输与保存

蓝冰运输。4℃保存，有效期12个月。注：避免冻融或离心磁珠。

技术参数

基质	硅基磁珠
配体	鼠源抗His单克隆抗体
粒径	200 nm
磁珠浓度	10 mg/mL
结合能力	≥ 0.5mg His标签融合蛋白/mL磁珠
适用范围	IP，Co-IP等

使用方法

贴壁细胞样品：

1. 移去培养基，用 PBS 洗细胞两次。

2. 收集细胞至1.5 mL EP 管内，按比例加入IP Lysis/Wash Buffer，同时加入PMSF等相应的抑制剂，混匀后置于冰上静置5-20 min（期间混匀几次）。

3. 4℃，12000-16000xg，10 min离心收集上清液，置于冰上以备后续实验（或置于-80℃长期保存）。

表1.培养皿IP Lysis/Wash Buffer推荐使用体积

培养皿大小/表面积	IP Lysis/Wash Buffer体积
100 mm x 100 mm	500-1000 µL
100 mm x 60 mm	100-300 µL
6孔板	100-200 µL

悬浮细胞样品：

1. 4℃、500-1000xg、10 min，收集细胞，弃上清。

2. 用PBS 洗细胞一次，即用 PBS 将细胞团重悬，4℃、500-1000xg、10 min，收集细胞，弃上清。

3. 用预冷的IP Lysis/Wash Buffer重悬细胞。每50mg 细胞使用500μL IP Lysis/Wash Buffer。同时加入PMSF等相应的抑制剂，混匀后置于冰上静置5-20 min（期间混匀几次）。

4. 4℃，12000 -16000xg，10 min离心收集上清液，置于冰上以备后续实验（或置于-80℃长期保存）。

血清样品：

一般建议建议用IP Lysis/Wash Buffer稀释血清样品至目标蛋白终浓度为50~150 µg/mL，置于冰上备用（或置于-20℃长期保存）。

免疫沉淀：

注：为保证磁珠均匀分布，使用前通过反复颠倒或轻微涡旋混匀瓶中磁珠。

1. 将20-50 µL 的Anti-His Magnetic Beads加入1.5 mL 离心管中。

2. 向磁珠中加入500 µL 预冷PBS，轻柔混匀。

3. 将离心管放入磁力架中收集磁珠到离心管的一边。去除上清。

4. 向离心管中加入200-500 µL IP Lysis/Wash Buffer。颠倒离心管数次或轻微涡旋混匀1 min。用磁力架收集磁珠，去除上清。

5. 将制备好含有His标记蛋白加入装有磁珠的离心管中，保持混匀室温下孵育1-2 h或 4℃ 2-4 h。

6. 用磁力架收集磁珠，除去未结合的样品，保存以备分析。

7. 向离心管中加入1000 µL IP Lysis/Wash Buffer，轻柔混匀。收集磁珠，弃上清。再重复洗两次。

8. 变性洗脱：向离心管中加入80-100 µL SDS-PAGE Sample Loading Buffer（1×），将样品置于100℃水浴或者金属浴中加热10 min。通过磁力架分离磁珠，保留含有目的抗原的上清。注：如需保持蛋白活性，也可采用以下洗脱方式。

低pH洗脱：向离心管中加入100 µL Elution Buffer。保持混匀在室温下孵育离心管5-10 min。通过磁力分离磁珠，保留含有目的抗原的上清。每100 µL洗出液中加入10 µL Neutralization Buffer来中和低pH。

注意事项

1. 本产品仅限于科学实验研究使用，不得用于临床诊断、治疗等领域。

2. 请勿高速离心、干燥或冷冻磁珠，这些操作会导致磁珠聚集而降低结合能力。

3. IP实验中不同类型的抗体与抗原结合的亲和性是有区别的，抗体与抗原结合还会受到IP Lysis/Wash Buffer的影响，如果使用本实验步骤不能获得最佳的实验结果，可自行优化操作细节或者筛选及配制缓冲液进行实验，推荐使用李记生物的相关产品推荐。

4. 磁珠使用前应充分振荡均匀。磁珠应保存在储存溶液中，防止干燥。